目的基因与标签蛋白融合时,标签是加目的基因的N端还是C端呢?
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云梦
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2024-08-16 •
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最后更新于 2024-08-16
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选择将标签融合到目标蛋白的C端还是N端,很大程度上取决于蛋白本身:蛋白的折叠方式,以及末端是否有功能要求。
1)对于蛋白太小容易被降解的和比较难表达的蛋白,可以利用N端的蛋白标签。这样既能保证蛋白的稳定性,也对外源蛋白的免疫原性影响也很小,该法适用于表位筛选。
2)如果目的蛋白是分泌蛋白或在N端有特殊结构,就会遇到在目的蛋白被切掉或被包埋的风险,此时蛋白标签需放在C端。
3)如果目的蛋白的C端内部折叠,融合蛋白放在C端可被检测到的可能性非常小,此时蛋白标签需放在N端。
4)在目的蛋白结构未知的情况下,可以分别于两端构建标记的表达克隆,以确定哪个更有效。