目的基因与标签蛋白融合时,如何选择合适的标签蛋白?
By
云梦
at
2024-08-16 •
0 人收藏 •
320 人看过
1 个回复 |
最后更新于 2024-08-16
登录后方可回帖
联系我们
返回顶部
小恒学术问答 Powered By © 2006-2022 汉恒生物 All Rights
论坛统计
沪ICP备12028140号
Processed in
16.767 ms,
4 SQL Query(s),
824.15 KiB Memory Usage
蛋白标签的具体功能主要包括以下几个方面:识别,纯化,定量,定位和示踪;那么如何选择合适的标签蛋白呢?
① 首先需要确定融合标签的目的,蛋白纯化首选His-Tag,Western blot首选Flag-Tag,免疫共沉淀可选择Flag标签或其他常用标签(如HA、c-Myc),观察荧光或活细胞成像则应该选择荧光蛋白或荧光素酶等。
② 考虑融合蛋白的影响:任何一类标签位于氨基酸序列的任一位置,都有影响目的蛋白表达或其功能的可能。最主要的原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠,致使目的蛋白失活或形成包涵体;其次,标签可能会中断亚细胞的定位信号,导致细胞能够正确翻译和折叠,但是所在细胞的位置是错误的,因此需要考虑添加的标签是否对目的蛋白的表达有影响。