用AAV做体内过表达时,检测目的基因的表达效果不太理想,有的甚至没有过表达,这种可能会是哪些原因导致的呢?
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梧桐树下
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2024-05-11 •
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最后更新于 2024-05-11
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AAV应用时效果不理想的有关影响因素很多,从病毒本身到检测目的基因表达这些过程都有涉及,具体可以从以下几个方面来分析:
(1)病毒本身:①病毒滴度是否符合实验要求;②插入的外源基因是否正确;③外源基因的长度是否在AAV的载体容量范围内,过大会导致出毒失败或滴度较低;④病毒运输和保存条件是否合适,应尽可能避免反复冻融,运输最好置于干冰中;⑤不同AAV血清型对不同组织的感染效率有差异,是否选择了合适的血清型;⑥AAV启动子的是否为强启动子或组织/细胞特异性启动子。
(2)注射方式及用量:针对不同组织的感染,选择正确的注射方式及注射量能够有效提高AAV的感染效率。
(3)实验动物及操作:实验动物的选择是否合适、注射AAV前实验动物的生长状态是否正常、实验人员的操作手法是否娴熟,这些也是影响实验结果的重要因素。
(4)检测方面:①AAV在体内表达的时间需要2周左右,达到表达高峰需要3-4周,选择这个时间段检测表达比较合适,一般可以维持表达3-6个月,若需要持续高表达可以适当得间隔1-2个月补打一次;②样本提取方法及操作是否得当,可采用多种方法进行检测。