大鼠尾静脉可能更好找，没什么特别要注意的。不过如果你是要注射老年大鼠，扎针力道应该要比小鼠更大，因为大鼠随着年龄的增长，尾巴皮肤的角质层也会增厚。
可以，先确认好sirna敲低效率吧。同时转转染效率肯定是不如单独转那么高的，敲低效率不确定，先试试吧。如果两个基因mrna有互作的话，那就不确定了。
RNAFit储存条件是4度，放-20可能会有影响，先试试吧
先看看sgrna的切割效率怎么样吧，直接转染细胞用这个混合细胞测序就可以，如果峰杂乱就是有活性。敲入还挺难做的
这个估计没法去优化，启动子是DNA序列起作用，不能为了合成方便而改变DNA的序列，只能让你那边合成公司试着合一下，说不定就成功了。
25比较保险吧，如果摸索过最佳的moi是50，用两个50肯定会对细胞毒性很大
感染效率达到了90%，这已经是一个很高的转染水平了啊，有显著表型差异就可以用于实验。没有百分之百转染率的，再提高FAM的浓度转染效率也不会有显著性差异。如果想再严谨点就重新设计梯度，不过我觉得已经这个效率已经够了。
可能是基因比较敏感，sirna或者转染试剂刺激了，看看试剂组有没有变化，如果是sirna影响，看看其他sirna对这个基因有什么影响；或者是这个细胞比较敏感，换细胞转染。也可能是脱靶效应吧，阴性对照比较意外地结合上，这个排除其他问题后再尝试换NC
这种可能的结果不是更特异，而是表达更广泛，两个特异性启动子对应的靶器官组织都会表达目的基因，要实现特异性表达可以考虑原位注射。
合成的是成熟体序列。因为mimics是进入细胞先到细胞质 直接起作用的。前体（mimics） 要到细胞核进行加工才能成成熟的miRNA，进入细胞核是有概率的，合成pri -miRNA是也有难度，因为长度很长，所以没有这么做的必要。如果想做pri-miRNA可以考虑用病毒载体。
不好意思，打错了，是jaspar……
看酶标仪是否可激发光，以及波长是否涵盖在里，如果满足这两个条件，可以用来看转染效率
可以用茎环法，用之前的反转录试剂盒和qpcr引物去做，只要检测的是相同的microRNA就不用换
不可以拍了，因为luc是酶，luc成像是一个酶促反应，需要底物。
这个敲除利用的是loxp/cre系统，主要是cre酶对DNA序列进行作用，不是对蛋白进行降解，对蛋白的结构应该没有什么要求。
可以多次注射ADV，一周注射一次，注射6周。
培养基里的酚红是一种酸碱指示剂，细胞生长代谢产生的酸性物质使pH降低，培养基呈现偏黄的现象；如果细胞增殖代谢较慢，培养基会偏红一点
