常用的载体å¯ä»¥æŒ‰ç…§å±žæ€§ã€è¿›å…¥å—体细胞的类型以åŠåŠŸèƒ½è¿›è¡Œåˆ†ç±»ï¼š
①按照属性分为病毒载体和éžç—…毒载体
ç ”ç©¶è›‹ç™½äº’ä½œçš„æ–¹æ³•å¾ˆå¤šï¼Œå¤§æ¦‚åˆ†ä¸ºå¦‚ä¸‹å‡ ç§ï¼šâ‘ é…µæ¯åŒæ‚交技术:主è¦ç”¨äºŽäº’作蛋白的ç›é€‰ï¼›â‘¡ å…疫共沉淀;③ å…ç–«è§å…‰å…±å®šä½ï¼›â‘£ GST Pull-down;⑤
蛋白磷酸化一般是å‘生在æŸä¸ªæ°¨åŸºé…¸ä¸Šï¼Œâ‘ 磷酸化一般å‘生在ä¸æ°¨é…¸ï¼ˆS)ã€è‹æ°¨é…¸ï¼ˆT)以åŠé…ªæ°¨é…¸ï¼ˆY),外æºæ€§çš„模拟磷酸化å¯ä»¥å°†S/T/Y
siRNAå¯ç”¨äºŽä½“内实验,但是动物体内生ç†çŽ¯å¢ƒæ¯”较å¤æ‚,需è¦æ高siRNA在体内的稳定性ã€åŠè¡°æœŸã€é¶å‘性ã€çº¯åº¦ã€æ´»æ€§ä»¥
tRNAæ¥æºçš„å°RNA(
AAV8å’ŒAAV9血清型对è‚è„å‡å…·æœ‰è¾ƒå¥½çš„嗜性,目å‰åº”用在
é’™æˆåƒæŠ€æœ¯æ˜¯åˆ©ç”¨ç‰¹æ®Šçš„è§å…‰æŸ“料或钙离å指示剂,将神ç»å…ƒä¸é’™ç¦»å浓度的å˜åŒ–通过è§å…‰å¼ºåº¦è¡¨çŽ°å‡ºæ¥ï¼ˆå³å°†çœ‹ä¸è§çš„钙离åä¿¡å·å˜æˆçœ‹å¾—è§å¯æ£€æµ‹çš„è§å…‰ä¿¡å·ï¼‰ï¼Œé€šè¿‡å¯¹é’™ç¦»åå˜åŒ–的快速æˆåƒï¼Œå应神ç»å…ƒçš„活性å˜åŒ–。
ç›®å‰ä½¿ç”¨æ¯”较多的钙离å指示剂主è¦åŒ…括化å¦è§å…‰æŒ‡ç¤ºå‰‚å’Œè§å…‰è›‹ç™½æŒ‡ç¤ºå‰‚两大类。
AAV6ã€AAV8ã€
蛋白磷酸化修饰这一过程是通过蛋白激酶催化,将磷酸基团从ATP转移到多肽底物的ä¸æ°¨é…¸ã€è‹æ°¨é…¸æˆ–酪氨酸残基上,并且磷酸化修饰的过程是å¯é€†çš„,蛋白磷酸酶å¯å‚¬åŒ–åŽ»ç£·é…¸åŒ–ã€‚è›‹ç™½ç£·é…¸åŒ–æ£€æµ‹çš„æ–¹æ³•åŒ…æ‹¬ï¼šæ”¾å°„æ€§æ ‡è®°ã€è›‹ç™½å…ç–«å°è¿¹ã€è§å…‰æŸ“料染色ã€æµå¼ç»†èƒžæœ¯å’Œè´¨è°±ç‰ã€‚å…¶
THP-1细胞ä¸æ–‡å…¨å为人å•æ ¸ç»†èƒžç™½è¡€ç—…细胞,是一ç§æ‚¬æµ®ç»†èƒžã€‚培养时有以下注æ„事项:①æ¢æ¶²æ—¶éœ€è¦é¢„çƒçš„培养基;② 细胞对血清的è¦æ±‚比较高,建议用å“质比较好的血清;③
一般æ¥è¯´ï¼Œæ ‡ç¾æ—¢å¯ä»¥æ·»åŠ 在目的蛋白的N端,也å¯ä»¥æ·»åŠ 在目的蛋白的C
AAV5对肺部的亲和性较高,å¯ç”¨äºŽè‚ºéƒ¨ç»„织感染,æ¤å¤–,AAV6
Crispr/cas9æ˜¯åŸºå› ç»„è°ƒæŽ§æŠ€æœ¯ä¸çµæ´»æ€§æœ€å¼ºçš„系统之一,其ä¸CRISPR I
å…‰é—ä¼ å¦ï¼ˆoptogenetics)是一ç§æ–°åž‹çš„光控细胞技术,结åˆäº†å…‰å¦ï¼ˆ
腺相关病毒(AAV)å¯ç”¨äºŽä½“外细胞感染,但是我们一般ä¸æŽ¨èAAV
åŒåˆ†åè§å…‰äº’补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC),该技术是利用è§å…‰è›‹ç™½çš„特点æ¥ç ”究蛋白的相互作用。è§å…‰è›‹ç™½å¯ä»Žç‰¹å®šçš„ä½ç‚¹è¢«åˆ†å¼€ï¼Œäº§ç”Ÿä¸¤ä¸ªéžè§å…‰æ´»æ€§ç‰‡æ®µã€‚当两片段分别被èžåˆåˆ°ç›¸äº’ä½œç”¨çš„è›‹ç™½ä¸Šæ—¶ï¼Œä¼šå› è›‹ç™½çš„ç›¸äº’ä½œç”¨åŠ›è€Œè¢«æ‹‰è¿‘ã€å‘生互补从而é‡æ–°æž„建æˆæœ‰æ´»æ€§çš„è§å…‰è›‹ç™½å¹¶åœ¨æ¿€å‘光下产生è§å…‰ã€‚å› æ¤åˆ©ç”¨è§å…‰æ˜¾å¾®é•œå°±å¯ä»¥ç›´æŽ¥é€šè¿‡è§‚察